رنگ EA50 بهار افشان

روش رنگ آمیزی پاپانیکولا (Papanicolaou’s stain) برای نمونه های سیتولوژی    

مرحله فیکساسیون

• ابتدا لام های مربوط به نمونه های سیتولوژی را در 3 ظرف گزیلول (هر کدام به مدت 20 دقیقه) قرار می دهیم.
• سپس آنها رادر الکل 96 درجه حداقل به مدت 30 دقیقه قرار داده تا کاملا فیکس شوند.
• سپس نمونه ها را به ترتیب 10 بار به الکل 80 درجه و 10 بار به الکل 70 درجه وارد و خارج کرده و بعد با آب شستشو می دهیم. 

مرحله رنگ آمیزی هسته

• ابتدا نمونه ها را به مدت 5 دقیقه در رنگ هماتوکسین که رنگ مخصوص هسته است قرار می دهیم.
• لام ها را با آب قلیایی یا آب شهری بدون کلر شستشو می دهیم. 
• لام ها را یک بار وارد محلول اسید الکل می کنیم تا رنگ هماتوکسین سیتوپلاسم از بین برود. سپس آنها را دوباره شستشو می دهیم. بعد لام ها را 3 بار وارد محلول کربنات لیتیم می کنیم تا رنگ هسته فیکس شود سپس با آب لام ها را شستشو می دهیم.

مرحله رنگ آمیزی سیتوپلاسم

• لام ها را به تعداد 10 بار وارد الکل 96 درجه می کنیم. بعد به مدت 4 دقیقه نمونه ها را در محلول رنگی Orange (Og6) قرار می دهیم.
• سپس نمونه ها را 2 بار در الکل 96 درجه وارد کرده و بعد به مدت 5 دقیقه در رنگ EA50 قرار می دهیم.

مرحله آبگیری

• در مرحله آبگیری، 2 ظرف حاوی الکل 96 درجه و دو ظرف حاوی الکل مطلق و 3 ظرف حاوی گزیلول تهیه کرده و لام ها را به ترتیب وارد ظروف حاوی الکل با درجه پایین ، الکل بادرجه بالا  و گزیلول می کنیم .
• پس از رنگ آمیزی لام ها بر روی آنها چسبی به نام Canad Bond می ریزیم. سپس بوسیله لام مقداری گزیلول برداشته و لامل را بر روی ان قرار می دهیم. در هنگام گذاشتن لامل باید دقت کنیم که حبابی ایجاد نشود.