نقد و بررسی

از محیط DNase برای تشخیص و افتراق باکتری ها در موارد مواجهه با کوکسی گرم مثبت کاتالاز مثبت و باسیل گرم منفی استفاده می شود. 

اساس آزمایش DNase:

این آزمایش با هدف تشخیص باکتری های DNase مثبت محیط کشت در ارزیابی فعالیت دزوکسی ریبونوکلئاز (DNase) باکتری ها و قارچ ها و خصوصا به عنوان کمک در تشخیص استافیلوکوک های بیماری زا به کار می رود.
DNase Test Agar With Toluiden blue برای کمک به تفکیک و تشخیص گونه سراشیای بدون پیگمان که ممکن است به اشتباه به عنوان گونه انتروباکتر و کلبسیلا تشخیص داده شوند، به کار می رود.

اگر استافیلوکوک آنزیم DNase داشته باشد این آنزیم، اسید نوکلئیک را هیدرولیز می نماید که با استفاده از معرف و ایجاد هاله شفاف در اطراف محل رشد باکتری می توان به این موضوع پی برد.

ویژگی های آزمایش:

  • حساسیت: ۹۹٪ استافیلوکوک های کواگولاز مثبت، DNase مثبت نیز هستند.
  • اختصاصیت: ۲۰٪ استافیلوکوک های کواگولاز منفی، DNase مثبت هستند.
    محیط مناسب برای برداشتن کلنی پلیت های LEMB Agar یا Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood حاوی ارگانیسم مورد نظر می باشد.
    از پلیت بلاد آگار برای استافیلوکوک ها و بلاد آگار یا مک کانکی برای نمونه های گرم منفی استفاده می کنیم.

تجهیزات و مواد مورد نیاز تست :
معرف اسید کلریدریک 1N (یک نرمال) یا معرف تولوئیدین بلو

محیط کشت DNase دارواش

مراحل اجرایی کار:

پلیت های DNase Test Agar یا DNase Agar with Toluidine Blue را با نمونه مورد نظر به صورت نقطه ای (یا خطی) تلقیح نمایید.
پلیت ها را به مدت ۲۴-۱۸ ساعت در دمای ۲ + ۳۵ سانتی گراد انکوبه نمایید.
پس از انکوباسیون، روی پلیت های DNase Test Agar ساده، اسید کلریدریک ۱ نرمال و یا تولوئیدین بلو
۰.۱٪ بریزید به گونه ای که سطح پلیت را کاملا بپوشاند و سپس آن را بر روی زمینه تیره قرار داده و بررسی نمایید.
تلقیح باید نقطه ای باشد، چون بعضی از سویه های استافیلوکوک اورئوس به خوبی بر روی محیط، رشد نمی کنند و در نتیجه میزان رشد برای ارزیابی فعالیت DNase کافی نخواهد بود. در صورت تلقیح نقطه ای، حتی اگر در محل تلقیح، رشدی ایجاد نشود می توان فعالیت DNase را ارزیابی نمود.

تفسیر نتیجه: 

محیط DNase

DNase Test Agar که اسید کلریدریک یک نرمال روی آن ریخته شده است:
الف) نتیجه مثبت : فورا هاله های شفاف کاملا مشخصی اطراف کلنی یا محل تلقیح را در محیط کشت احاطه می کنند.
ب) نتیجه منفی : اطراف کلنی ها یا محل تلقیح شفاف نمی شود.
DNase Test Agar که تولوئیدین بلو ۰/۱٪ روی آن ریخته شده است:
الف) مثبت:
هاله های شفاف قرمز صورتی، اطراف کلنی یا محل تلقیح را احاطه می کنند. محیط در جایی که DNA باقی مانده باشد آبی می شود.
ب) منفی:
هاله های کدر قرمز صورتی اطراف کلنی یا محل تلقیح را احاطه می کنند.

– پس از انکوباسیون روی پلیت های DNase Test Agar With Toluidine Blue ، معرف ریخته نمی شود و مستقیما بررسی می گردد.
۱) مثبت (+): هاله شفاف قرمز صورتی واضحی اطراف کلنی یا محل تلقیح را در یک محیط آبی (نیلی) احاطه می کند.
۲) منفی (-): بدون تغییر، محیط به رنگ آبی تیره شفاف باقی می ماند.
توجه : پلیت های DNase Test Agar with Toluidine Blue را می توان مستقیما بدون افزودن معرف بررسی نمود، چون خود محیط کشت حاوی , g/lit ۰/۰۵ از ماده 0 Toluidine Blue می باشد. مقدار این ماده در محیط کشت نباید از ه ” ” ” 10 می باشد. مقدار این ماده در محیط کشت نباید از
٪ تجاوز کند چون در غلظت های بالاتر ممکن است
۰/۰۰۵ شناسایی فعالیت DNase را مشکل سازد.

-کنترل کیفی:

Staphylococcus aureus ATCC رشد متوسط تا زیاد، احاطه شده با هاله شفاف صورتی تا قرمز (کنترل مثبت) 
Staphylococcus Epidermaidis ATCC: رشد متوسط تا زیاد، بدون هاله (کنترل منفی)
در آزمایشگاه هایی که از محیط کشت آماده از شرکت دارواش استفاده میشود میتوان به کنترل کیفی ارائه شده توسط شرکت استناد نمود.

 

برای خرید و دریافت اطلاعات بیشتر درباره ی محیط DNAse دارواش (پلیت 6 و 8 سانت) با کارشناسان پارس پیوند تماس بگیرید.