توضیحات
ADA تستی می باشد که در آن آنزیمی به نام آدنوزین دآمیناز را مورد بررسی قرار می گیرد .این آنزیم که در مسیرهای متابولیکی فعالیت دارد، با دآمینه کردن آمینواسید آدنوزین، آن را به اینوزین و داکسی اینوزین تبدیل می کند.
در بیمارانی که دچار نقص ایمنی شدید SCID (نوعی سندروم اتوزومال مغلوب) هستند، از این آنزیم وجود ندارد که به آن نقص ADA یا ADA-SCID نام برده می شود که به آن نقص ایمنی مرکب نیز گفته می شوند.
در نتیجه آدنوزین تجزیه نمی شود و به عناصر دیگر تبدیل می شود و در بافته ای بدن جمع می شود و متعاقبا باعث بروز برخی مشکلات می شود. از جمله این مشکلات عدم مقاومت در برابر بیماریهای باکتریایی و قارچی و ویروسی می باشد که این افراد را به شدت مستعد عفونت می کند که دائم نیز تکرار می شوند.
علائم بیماری نقص ADA
- اسهال مزمن
- پنومونی (ذات الریه)
- راش های پوستی
- سوء تغذیه
- کاهش رشد کودکان نسبت به کودکان سالم
اهمیت کلینیکی
ADA آنزیمی است که واکنش دیـآميناسيون آدنوزین به اینوزین را یک طرفه کاتاليز می کند. این آنزیم بطور گسترده در بافتهای بدن و عمدتاً در لنفوسيت T پخش شده است. افزایش فعاليت این آنزیم در بيماری هایی مانند: هپاتيت حاد ، مزمن و فعال، هپاتيت ویرال، سيروز کبدی و هپاتوم (تومورکبد) و نيز بيماریهایی مانند سل، تيفوئيد، آرتریت روماتوئيد، بروسلوز، سارکوئيدوز و لوسمی ALL مشاهده می گردد. اندازه گيری ADA همراه با تست های دیگر کبد مانند: ALT و GGT ارزش ویژه ای در تشخيص بيماری های کبد دارد. از موارد مهم اندازه گيری ADA بررسی فعاليت آن در مایع CSF و مایع پلور است که با حساسيت بسيار زیاد، اجازه تشخيص بيماری سل را می دهد. کاهش ADA در حدود یک چهارم کودکان مبتال به بيماری SCI( immunodeficiency combined Severe ) دیده شده است.
شرایط نمونه گیری
- نمونه می بایست سریعاً سانتریفیوژ شده و 0.3 ml از مایع رویی را برداشته و به ویال پلاستیکی انتقال دهید.
- جهت جمع آوری نمونه، بر روی یخ نگهداری شود.
- نمونه فوراً تا زمان آزمایش فریز گردد.
ملاحظات نمونه گیری
- نمونه گیری مایعات بیولوژیک باید توسط پزشک انجام شود.
- نمونه باید تا زمان آزمایش فریز شود.
- نمونه دفریز شده نباید مجدداً فریز گردد.
- سن بیمار را یادداشت نمایید.
- نوع نمونه را یادداشت نمایید.
موارد عدم پذیرش نمونه
- نمونه همولیز شده مورد قبول نمی باشد.
- فریز دفریز مکرر باعث رد نمونه می گردد.
شرایط نگهداری
- نمونه به مدت 12-6 ساعت در دمای اتاق (RT) و 1 هفته در دمای C◦4 پایدار است.
- جابجایی نمونه روی یخ صورت گیرد.
کاربردهای بالینی
فعالیت آنزیمی در بیماران توبرکلوز نسبت به سایر بیماری های تنفسی کودکان بسیار بالاتر است. افزایش آنزیم در جریان عود مجددی سارکوئیدوز مزمن مشاهده می شود. در بیماری های مجاری صفراوی پایین و بیماری های مزمن کبدی همیشه بالاست.
اساس روش
این کيت بر اساس یک روش آنزیمی تهيه شده است که در آن سوبسترای آدنوزین به اینوزین تبدیل شده و آمونياك آزاد می گردد. در مرحله دوم آمونياك در مجاورت آلفا کتوگلوتارات و NADPH توسط آنزیم گلوتامات دهيدروژناز به گلوتامات و NADP تبدیل میگردد. کاهش جذب متناسب با مقدار ADA نمونه میباشد و در طول موج 340 نانومتر اندازه گيری مي شود.
معرف ها
Storage | Content | Presentation |
2-8°C | 1×50 ml | R1: ADA Enzyme reagent |
2-8°C | Powder(for 10ml) | R2: ADA Substrate reagent |
شرایط نگهداری
معرف ها در دمای 8-2 درجه سانتيگراد تا تاریخ انقضاء مندرج برروی ویال ها پایدار می باشند، مشروط بر اینکه درب ویال ها بسته و آلوده نگردند. پس از هر بار استفاده درب ویالها را بسته و به یخچال انتقال دهيد.
پس از باز نمودن بمدت 30 روز پایدار می باشند. آماده سازی معرف ها: معرف R1 آماده مصرف مي باشد. جهت آماده سازی R2 میزان 2 ميلی ليتر آب مقطر به ریال آن افزوده خوب مخلوط کنيد تا یکنواخت شود. پایداری این معرف 4 هفته در یخچال و 2 روز در دمای اتاق است. توصيه مي شود پس از مصرف بلافاصله درب ویال را بسته و به یخچال انتقال یابد.
نمونه مورد آزمایش
سرم تازه بدون هموليز، پالسما با سدیم هپارین و یا EDTA و CSF و Pleura .عبدا از آمونيوم هپارین و نمکهای فلوراید استفاده نشود. پایداری ADA در دمای 8-2 درجه سانتيگراد به مدت یک هفته می باشد. کليه نمونه های مورد آزمایش مانند: سرم، پالسما، CSF و Pleura باید حتما عاری از هموليز باشند.
CSF :نمونه را بلافاصله سانتریفيوژ و جدا کنید. نمونه در دمای اتاق به مدت 2 ساعت و در دمای 8-2 درجه سانتيگراد به مدت یک هفته و در دمای فریزر به مدت 1 ماه دوام دارد.
Pleural :نمونه را بلافاصله سانتریفيوژ و جدا کنید. نمونه در دمای اتاق به مدت 2 ساعت و در دمای 8-2 درجه سانتيگراد به مدت یک هفته و در دمای فریزر به مدت 1 ماه دوام دارد. نمونه باید حتما شفاف باشد.
پارامترها
- دما: 37 درجه سانتيگراد
- طول موج: 340 نانومتر
- کووت:1سانت
- حجم نمونه: 200 ميکروليتر
- حجم معرف: 1200 ميکروليتر
- خوانش: مقابل آب مقطر یا هوا
- نوع واکنش: کاهشی.
روش اندازه گیری دستی | بلانک معرف | کالیبراتور | نمونه |
نمونه /کالیبراتور | — | 200 ميکروليتر | 200 ميکروليتر |
آب مقطر | 200 ميکروليتر | — | — |
معرف R1 | 1000 ميکروليتر | 1000 ميکروليتر | 1000 ميکروليتر |
به آرامی مخلوط نموده، 3 دقيقه در دمای 37 درجه سانتيگراد انکوبه کرده جذب نوری بالنک، کاليبراتور و نمونه ها را مقابل آب مقطر خوانده و یادداشت نمائيد. (A1) | |||
معرف R2 | 200 ميکروليتر | 200 ميکروليتر | 200 ميکروليتر |
مخلوط کرده، 5 دقيقه در دمای 37 درجه سانتيگراد قرار داده و راس 5 دقیقه جذب ها را مجدداً خوانده و یادداشت نمائيد. (A2) |
واکنش تداخلی
وجود کلرور جیوه– بنزوآت باعث پایین آمدن فعالیت آنزیمی در شرایط واکنش شیمیایی (Invitro) می گردد.
توضیحات
کمبود آنزیم آدنوزین دآمیناز در 25% موارد بیماری نقص شدید ایمنی مرکب (SCID) مشاهده می گردد.
مقادیر طبیعی ADA
- اگزودا مایع پلرو : >3 .0 , g/dL: 1.6-9.2 U/L پروتئین تام
- ترانسودا مایع پلرو: g/dL :0-6.7 U/L , 3.0 پروتئین تام
- اگزودا مایع پریتوان : >2.0 , g/dL : 0-7.6 U/L پروتئین تام
- ترانسودا مایع پریتوان : <2.0 , g/dL : 0-7.6 U/L پروتئین تام
- خون: U/gr Hb 0.5 -1.7
- سرم: U/L 11.5 – 25
روش انجام آزمایش ADA
- روش متداول:کالریمتریک
- سایر روش ها: اسپکتروفتومتری UV و فلوئورومتری
پیشنهاد بررسی: بروسلا آگار کوندا – نوار قند MN کوندا – PH متر رومیزی لابترون – لوله مخروطی در پیچدار لابترون –کنترل ها شرکت من –جعبه نوک سمپلر زرد دربدار لابترون
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.