توضیحات
محیط کشت KIA
محيط كشت KIA، یک محیط لوله ای شیب دار به رنگ قرمز -نارنجی است که برای نشان دادن توانایی تخمیر لاکتوز در خانواده انتروباکتریاسه استفاده می شود. این محیط حاوی كازئين و پپتون هاي گوشت، لاكتوز، دكستروز و معرف فنل رد و فروس سولفات می باشد.
فنل رد در شرایط اسیدی زرد و در شرایط قلیایی قرمز می شود. تخمیر قند ها توسط باکتری اسید تولید می کند. با تغيير رنگ معرف pH ( فنل رد) در در واکنش با اسيد توليد شده، گونه های باسيل های روده ای تفكيک می شوند.
غلظت دكستروز در اين محيط 0.1 %غلظت لاكتوز است. تركيب سيترات آمونيم فريک و تيوسولفات سديم، منجر به شناسايی توليد سولفيد هيدروژن را می گردد. محیط KIA مانند محیط TSI میباشد، به استثنای این که فاقد قند ساکارز است.
روش انجام آزمایش با محیط کشت KIA
این محیط معمولا در لوله آزمایش به نحوی ریخته می شود که دارای سطح شیبدار (slant) و قسمت استوانه ای انتهایی یا باث (Butt) می باشد.
با آنس استریل مقداری از کلنی باکتری مجهول را برداشته و به صورت مارپيچي روي تمام سطح شيب دار کشت دهید و سپس در عمق آگار تا فاصله 5-3 ميلي متري عمق لوله، تلقيح نماييد. لوله ها را به مدت 24 ساعت و در صورت عدم واکنش تا 81 ساعت ، در دمای 35 درجه سانتی گراد در شرايط هوازي انكوبه نماييد. بعد از انكوباسيون، نتيجه واكنش در سطح شيب دار و عمق از نظر تولید اسید، تولید گاز و توليد سولفيد هيدروژن را مشاهده نمایید.
تفسیر نتیجه:
باکتری های خانواده انتروباکتریاسه و سایر باکتری های تخمیر کننده گلوکز ابتدا گلوکز را متابولیزه کرده و ایجاد اسید می کنند. اسید تولیدی موجب تغییر رنگ معرف فنل رد از قرمز به رنگ زرد می شود، به این ترتیب پس از ۶ ساعت از انکوباسیون TSI هر دو بخش ,Butt Slant (شیب و عمق محیط) زرد می شود. اما اگر ارگانیسم تخمیر کننده گلوکز نباشد، قسمت شیب و عمق قرمز رنگ می ماند.
از آنجایی که مقدار گلوکز محیط کم است پس از این مدت مقدار گلوکز به دلیل مصرف شدن توسط باکتری ها کاهش یافته و تنها باکتری هایی که قادر به تخمیر لاکتوز یا سوکروز باشند به عمل تخمیر و تولید اسید ادامه میدهند و چون مقدار لاكتوز و سوکروز زیاد است به راحتی این کار را انجام خواهند داد. فرمول این واکنش A/A نوشته می شود و Acid over Acid خوانده می شود.
درصورت عدم مصرف لاکتوز محیط توسط ارگانیسم مورد آزمایش، انرژی مورد نیاز خود را از مصرف پروتئین ها و اسیدهای آمینه به دست می آورد که در شرایط هوازی محصولات جانبی قلیایی نظیر آمونیاک را به وجود می آورند و موجب تغییر رنگ فنل رد به رنگ اولیه خود یعنی قرمز رنگ می شوند.
به این ترتیب بعد از ۱۸ تا ۲۴ ساعت انکوباسیون لوله محیط کشت KIA حاوی یک باکتری تخمیر کننده گلوکز که فاقد توانایی تخمير لاكتوز است، مشاهده میشود که در قسمت slant قرمز رنگ و در قسمت عمقی زردرنگ است. این واکنش را ALK/A) Alkaline over Acid) می خوانند.
تولید گاز و سولفید هیدروژن
اگر باکتری در حین تخمیر، گاز CO2 نیز ایجاد کند، موجب بروز شکستگی در محیط با ایجاد حباب می شود و گاهی مقدار گاز تولیدی زیاد است و محیط را به سمت بالا می راند.
باکتری هایی که دارای آنزيم desulfurase می باشند، قادرند اسید آمینه های حاوی سولفور را مانند سیستئین و متیونین را دی سولفوره کرده و ایجاد گاز H2S نمایند که این گاز در اثر ترکیب با آهن موجود در محیط ایجاد رسوب سیاه رنگ FeS می نماید. بنابراین هرکجا در این لوله سیاهی دیده شود، نشان دهنده به وجود آمدن گاز H2S می باشد.
نکات:
- هنگام بیرون آوردن نیدل از ته لوله، شکستگی در محیط جامد ایجاد نشود، زیرا ممکن است این ترک با تولید گاز توسط باکتری اشتباه شود.
- سر لوله باید شل باشد تا جریان هوا آزادانه عبور نماید.
- لوله ها پس از ۱۸ تا ۲۴ ساعت بررسی شوند، وگرنه ممکن است رنگ لوله ها عوض شود.
- در هر دو محیط TSI ،KIA مقدار محدودی گلوکز و دو برابر غلظت گلوکز از قندهای لاکتوز و سوکروز وجود دارد.
برای خرید و دریافت اطلاعات بیشتر درباره ی محیط کشت KIA دارواش با کارشناسان پارس پیوند تماس بگیرید.
پیشنهاد بررسی :
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.