یکی از انواع محلول های رنگ آمیزی پاپ اسمیر، محلول رنگ OG6 است که معمولاً به شکل نمک سدیمی و به‌صورت پودر یا کریستال‌های نارنجی‌رنگ وجود دارد از همین رو به اورنج جی یا  محلول رنگ  OG6 مشهور است.

محلول OG6 حاوی رنگ نارنجی در الکل اتیل ۹۵٪ با مقدار کمی اسید فسفاتوتونگستیک است. در محلول رنگ OG6، «OG» نشان‌دهنده نارنجی و «۶» نشان‌دهنده غلظت اسید فسفوتونگستیک اضافه شده است. انواع دیگری نظیر OG5  و OG8 نیز وجود دارند.

پارس پیوند، مشاور شما در تامین مواد مصرفی آزمایشگاه

برای بهره مندی از فستیوال فروش ویژه محصولات نوترون شیمی با مشاوران ما در شرکت پارس پیوند در تماس باشید.

راه های تماس با ما:

• شماره تلفن شرکت:5-40660490-021    
• داخلی: 1053، 1055، 1056، 1058
• شماره های واتساپ: 09101701080،09103146893،09136641890، 09123147287

دایرکت اینستاگرام: @parspeyvand

رنگ آمیزی پاپ اسمیر (Pap smear staining) یا رنگ آمیزی پاپ (Pap staining) یکی از پرکاربردترین رنگ آمیزی های اختصاصی در سیتولوژی و هیستولوژی است که به متخصصین پاتولوژیست جهت تشخیص بیماری های مربوط به دهانه رحم (Cervical) مخصوصا سرطان دهانه رحم کمک گسترده ای کرده است. اساس رنگ آمیزی پاپ اسمیر استفاده از چندین رنگ و ایجاد تمایز بین سلولها و اجزای مختلف سلولهای اسمیر نمونه های مورد بررسی روی اسلایدهای میکروسکوپی می‌باشد. این تکنیک متداول‌ترین رنگ آمیزی اجزای سلولی در اسمیر سلول‌های لایه برداری شده، واژینال، دهانه رحم، مایع نخاعی و غیره است.

سه ویژگی اصلی در تکنیک رنگ آمیزی پاپ اسمیر که سبب شده تا محققین حوزه سرطان شناسی و پاتولوژیست ها در حوزه تشخیصی درمانی، به این تست توجه ویژه ای داشته باشند عبارتند از:

• در این تکنیک هسته سلولها در نمونه را رنگ کرده و در نتیجه در شناسایی ناهنجاریهای هسته سلول های سرطانی کمک ویژه‌ای می کند.

• سیتوپلاسم سلول‌ها را رنگ‌آمیزی می‌کند. بنابراین مشاهده سلول‌ها را تسهیل می بخشد.

• رنگ‌آمیزی پاپ اسمیر سبب تمایز و شناسایی بین انواع سلول‌ها مانند سلولهای اسیدوفیل و بازوفیلی می شود.

رنگ آمیزی پاپ یا رنگ آمیزی پاپانیکولائو یک تست پلی‌کروماتیک یا چند رنگی است که شامل رنگ های اسید و بازی هستند. این رنگ‌ها عبارتند از:

• رنگ هماتوکسیلین( Hematoxylin)
• رنگ اورنج گرین G (Orange Green G)
• رنگ ائوزین آزور (Eosin Azure)
• رنگ Light green SF
• رنگ Bismarck brown Y

کلیه رنگ های ذکر شده در سه محلول اضافه می شوند. هر یک از رنگها جزئی از سلول را رنگ‌آمیزی می کند.

مراحل آماده سازی لام از نمونه بافتی در رنگ آمیزی اختصاصی پاپ اسمیر

هنگامی که نمونه مورد بررسی بافت است ابتدا می بایست بافت طی یک سری مراحل فیکس گردد.

نمود.

روش انجام رنگ آمیزی پاپ اسمیر به دو نوع progressive و regressive انجام می شود. در روش progressive ، هسته به رنگ آبی طبق شدت رنگی که نیاز است، رنگ آمیزی می شود. در این روش، استفاده از رنگ های Mayer Hematoxylin و Gill’s hematoxylin ترجیح داده می شود.

در روش دوم (regressive) لام تهیه شده با رنگ هماتوکسیلین غیر اسیدی بسیار پرنگ رنگ آمیزی می شود. رنگ های اضافی با محلول اسیدی HCl رقیق شده حذف می شود. Harris Hematoxylin برای روش دوم ترجیح داده می شود. زمان‌بندی در این روش بسیار مهم است، زیرا رنگ‌زدایی ممکن است منجر به هایپوکرومیک شدن هسته‌های هیپرکروماتیک شود.

روش progressive رایج ترین روشی است که امروزه در آزمایشگاه ها مورد استفاده قرار می گیرد. کنترل آن آسان‌تر است. رنگ‌آمیزی معمولی زمان‌بر بود، از این روش اول یعنی رنگ‌آمیزی سریع پاپ ایجاد شد.

تفسیر نتایج رنگ آمیزی پاپ اسمیر:

در رنگ آمیزی پاپ یا پاپ اسمیر از چند رنگ اسیدی و بازی برای رنگ آمیزی قسمت های مختلف اسیدی و بازی سلولهای فیکس شده روی لام های میکروسکوپی استفاده می ‌شود. تمایز اجزای مختلف سلول ها در نتیجه انجام تکنیک رنگ آمیزی پاپ اسمیر سبب شده تا از آن در تحقیقات علمی پاتولوژی بویژه سرطان دهانه استفاده ویژه شود.

در این تکنیک هسته سلولها را آبی رنگ کرده و در نتیجه ناهنجاریهای هسته سلول­های سرطانی از سلولهای طبیعی قابل شناسایی است.

• سلول­های اسیددوست قرمز رنگ می شوند.
• سلول­های بازوفیل سبز-آبی رنگ آمیزی می شوند.
• اریتروسیت ها به رنگ نارنجی متمایل به قرمز مشاهده می­شوند.
• ائوزینوفیل ها نارنجی متمایل به قرمز رنگ می شوند.
• قارچ کاندیدا در نمونه هدف قرمز رنگ آمیزی می شود.
• تریکوموناس (Trichomonas) به رنگ سبز یا خاکستری قابل مشاهده است.
• سلولهای Superficial صورتی  و سلولهای Parabasal و Intermediate سبز- آبی رنگ آمیزی می شوند. سلولهای Superficial بزرگترین سلولها در اسمیر نمونه واژن هستند و نسبت به Parabasal و Intermediate تکامل یافته تر می باشند.
• کراتین سلولها با رنگ زرد و نارنجی قابل تمایز است.

در نتایج حاصل از رنگ آمیزی پاپ اسمیر در نمونه های اسمیر از سرویکس، ASCUS ( Atypical Squamous Cells of Undetermined Significance) مورد توجه بسیاری از پاتولوژیست ها و محققان سرطان شناسی قرار گرفته است. از آنجایی که تغییرات سلولی در ASCUS ممکن است منعکس کننده یک تغییر خوش خیم یا یک ضایعه جدی باشد، تشخیص و تفسیر آنها پراهمیت می باشد. در شکل شماره ۳ بزرگ شدن هسته در سلول های سنگفرشی Superficial و Intermediate مشاهده می شود. هسته ها ۲.۵ تا ۳ برابر اندازه یک هسته طبیعی بزرگ می شوند و ممکن است هیپرکرومازی (hyperchromasia )خفیف با کروماتین دانه¬ای و یکنواخت داشته باشند. بی نظمی های غشای هسته ای رایج نیستند.

روش استفاده از رنگ  OG6 چگونه است؟

ابتدا نمونه‌ها را سانتریفیوژ می‌نماییم. نمونه‌های سیتولوژی معمولاً به‌وسیله سرنگ یا لوله‌آزمایش به بخش پاتولوژی منتقل می‌شوند.

سپس از رسوب آنها یک قطره برداشته و بر روی لام قرار می‌دهیم.

سپس لام‌های مربوط به نمونه‌های سیتولوژی را در ۳ ظرف گزیلول (هرکدام به مدت ۲۰ دقیقه) قرار می‌دهیم.

سپس آنها را در الکل ۹۶ درجه حداقل به مدت ۳۰ دقیقه قرار داده تا کاملاً فیکس شوند.

پس از آن نمونه‌ها را به ترتیب ۱۰ بار به الکل ۸۰ درجه و ۱۰ بار به الکل ۷۰ درجه وارد و خارج کرده و بعد با آب شستشو می‌دهیم.

در مرحله رنگ‌آمیزی هسته ابتدا نمونه‌ها را به مدت ۵ دقیقه در رنگ هماتوکسین که رنگ مخصوص هسته است قرار می‌دهیم.

بعد لام‌ها را با آب قلیایی یا آب شهری بدون کلر شستشو می‌دهیم.

لام‌ها را یک‌بار وارد محلول اسید الکل می‌کنیم تا رنگ هماتوکسین سیتوپلاسم از بین برود. سپس آنها را دوباره شستشو می‌دهیم. بعد لام‌ها را ۳ بار وارد محلول کربنات لیتیوم می‌کنیم تا رنگ هسته فیکس شود سپس با آب لام‌ها را شستشو می‌دهیم.

در مرحله رنگ‌آمیزی سیتوپلاسم لام‌ها را به تعداد ۱۰ بار وارد الکل ۹۶ درجه می‌کنیم. بعد به مدت ۴ دقیقه نمونه‌ها را در محلول رنگ OG6 قرار می‌دهیم.

سپس نمونه‌ها را ۲ بار در الکل ۹۶ درجه وارد کرده و بعد به مدت ۵ دقیقه در رنگ EA50 قرار می‌دهیم.

در مرحله آبگیری، ۲ ظرف حاوی الکل ۹۶ درجه و دو ظرف حاوی الکل مطلق و ۳ ظرف حاوی گزیلول تهیه کرده و لام‌ها را به ترتیب وارد ظروف حاوی الکل با درجه پایین، الکل با درجه بالا و گزیلول می‌کنیم .

پس از رنگ‌آمیزی لام‌ها بر روی آنها چسبی به نام Canad Bond می‌ریزیم. سپس به‌وسیله لام مقداری گزیلول برداشته و لامل را بر روی آن قرار می‌دهیم. در هنگام گذاشتن لامل باید دقت کنیم که حبابی ایجاد نشود.

رنگ  OG-6 برای رنگ‌آمیزی کراتین استفاده می‌شود.

در محلول پاپانیکولائو، یک الگوی رنگ‌آمیزی کم رنگ و زرد نارنجی در سلول‌های اپیتلیال سنگفرشی بالغ و کراتینه شده به دست می آید.

رنگ آمیزی پاپانیکولائو (پاپ اسمیر) یک تکنیک رنگ آمیزی روتین است که معمولاً در آزمایشگاه های پاتولوژی دهان کاربرد دارد. این رنگ برای تمایز سلول ها در اسمیر ترشحات مختلف بدن استفاده می شود. کاربرد اصلی رنگ G6 نارنجی در رنگ پاپانیکولائو برای رنگ آمیزی کراتین است. سلول های سطحی با مقادیر بالای کراتین رنگ زرد-نارنجی و سلول های Parabasal به رنگ سبز تا آبی رنگ می شوند. هسته ها آبی تیره، سیتوپلاسم آبی روشن تا تیره، دسموزوم ها سبز رنگ شدند. در شکل شماره کارسینومای سلول سنگفرشی یک نئوپلاسم است که در نمونه بیمار اعتیاد به تنباکو و الکل مشاهده می شود.