نقد و بررسی

پارافین پاتولوژی،سبب ثابت شدن بافت ها میشود. همچنین سبب قرار گیری نمونه ی بافتی در بافت میشود. این ثابت شدن سبب سخت شدن بافت و برش ساده تر بافت می گردد.

در ادامه ی کار میتوان نمونه برداشتی را رنگ آمیزی کرد. پس از رنگ آمیزی نیز میتوان زیر میکروسکوپ قرار داد. در هیستوپاتولوژی، از موم پارافین برای تعبیه نمونه های جراحی استفاده می شود. پس از جامد شدن، قطعه پارافین با نمونه تعبیه شده به میکروتوم منتقل می شود. ابزاری با چاقوی بسیار تیز، که باعث برش بافت برای بررسی در زیر میکروسکوپ می شود. مهمترین ویژگی در این کار، حفظ توانایی ایمنی آنتی ژن است. به ویژه برای آنتی ژن سطح سلول است.

فروش پارافین پاتولوژی در فروشگاه اینترنتی پارس پیوند با قیمت مناسب و کیفیت تضمینی صورت می گیرد. جهت دریافت اطلاعات پیرامون خرید آن و آگاهی از قیمت و انواع آن با کارشناسان پارس پیوند تماس حاصل فرمایید.

آزمایش پاتولوژی

تمام مراحل کاری از ابتدای پذیرش نمونه درآزمایشگاه پاتولوژی تا آماده سازی لام و بررسی آن در زیر میکروسکوپ به عنوان روش های تکنیکی آسیب شناسی در نظر گرفته می‌شود که شامل هفت مرحله جداگانه است:‏
‏۱) فیکساسیون
۲) نمونه برداری یا پاس دادن
۴) آبگیری و آغشتگی
۴) قالب‌گیری
‏۵) برش با میکروتوم
۶) رنگ‌آمیزی
‏۷) مونتاژ لام و لامل

1) فيکساسيون‎(fixation)‎‏

اين مرحله صرفا”جهت حفظ ساختمان فيزيکي بافت و براي جلوگيري از اتوليز ‏‎(Autolysis)‎‏ آن انجام مي‌شود. نمونه جراحي شده بايد بلافاصله درون ماده فيکساتيو قرار بگيرد. براي اين کار بايد نوع بافت، درجه حرارت دوران پروسه، زمان فيکساسيون و ‏PH‏ محلول هاي به‌کار برده شده را در نظر داشت.

2) نمونه برداري يا پاس دادن

براي اجراي اين مرحله، نمونه بايد از لحاظ اندازه کاملا” مناسب باشد. چنانچه نمونه بزرگتر از حد معمول باشد مواد آبگير مانند گزيلول، الکل و … نمي‌تواند در آن نفوذ کند و چنانچه خيلي کوچک باشد تهيه نمونه و به دنبال آن برش و تهيه لام و… مشکل خواهد شد. 

3) آبگيري و آغشتگي

 اين کار توسط دستگاهي به نام تيشو پروسسور (‏Tissue Processor‏) انجام مي‌شود که شامل  دوازده ظرف حاوي محلول هاي مختلف است.

اين محلول‌ها 3 وظيفه بر عهده دارد: ‏

الف) آبگيري  ب) شفاف کردن   ج) آغشتگي با پارافين
حجم کلي هر ظرف  1000ميلي ليتر است و ترتيب آن ها بدين صورت است:
ظروف شماره 1 و 2 حاوي فرمالين 10% است. نمونه برش داده شده حدود 3 ساعت در فرمالين قرار مي‌گيرد. (چنانچه اين زمان بيشتر باشد اشکالي ايجاد نمي‌کند). در بعضي موارد، در ظرف شماره 2 به جاي فرمالين از آب مقطر استفاده مي‌شود. مدت زمان قرار گرفتن نمونه در آب مقطر يک ساعت است. ‏
ظرف‌هاي سوم تا ششم شامل الکل (متانول) است، ظرف شماره  3 الکل 70%و ظرف شماره 4 الکل 80%، ظرف شماره 5 الکل 90% و ظرف شماره 6 الکل 96% است. علت صعودي انتخاب کردن اين الکل‌ها اين است که آب‌گيري به آرامي انجام شود.

زمان قرار گرفتن نمونه در هر کدام از اين الکل‌ها يک ساعت است. به طور کلي اتانول بهتر از متانول آبگيري مي‌کند ولي به علت هزينه بالاتر، از متانول استفاده مي‌شود. در عين حال متانول خاصيت رنگبري هم دارد. اين مرحله بسيار مهم است و چنانچه آبگيري با الکل به خوبي انجام نشود مراحل بعدي نيز  دچار اشکال شده وسبب چروکيدگي بافت‌ها خواهد گرديد. ‏

ظروف شماره‌هاي 7 و 8 حاوي الکل متانول مطلق 100% استکه در مجموع 4ساعت آب‌گيري آنها به طول مي‌انجامد.  ظروف 9 و10 گزيلول است که وظيفه شفاف‌سازي بافت و خارج کردن الکل از آن را به عهده دارد.‏
ظروف شماره 11و12 حاوي پارافين است. پارافين در دماي آزمايشگاه جامد است و بايد به دماي ذوب ( 60 درجه سانتي گراد)، برسد . براي همين منظور دو ظرف آخر داراي المنتي است که باعث توليد حرارت در ظرف و ذوب شدن پارافين مي‌شود. بعد از اينکه نمونه داخل  پارافين مذاب قرار گرفت. اين ماده داخل بافت نفوذ کرده و بافت به حالت آغشتگي مي‌رسد.

پارافين در شکاف و درز بافت نفوذ مي‌کند و در دماي آزمايشگاه بافت سفت و سخت شده و قابل برش با ميکروتوم خواهد شد. لازم به ذکر است که ماده آغشتگي با ماده قالب‌گيري بايد يکي باشد.‏
دستگاه تيشو پروسسور مجهز به دکمه‌هاي خودكار تنظيم زمان (‏Timer‏)، دکمه‌هاي روشن و خاموش و بالا و پائين و چرخشي و چراغ‌هايي براي اطمينان از روشن بودن دستگاه و همچينين دکمه‌هاي تنظيم برنامه و تعيين سيکل دستگاه است تا معمولا” حدود 18 ساعت طول مي‌کشد که يک سيکل کامل شود. در شکل شماره (2) دستگاه تيشوپروسسور مشاهده مي‌شود.‏

4) قالب‌گيري

 براي قالب‌گيري بايد ماده آغشتگي (پارافين) را در دماي 60 درجه سانتي گراد داخل فور ذوب کرده و مقداري موم به نسبت 1 به 10 به آن اضافه کرد. از موم براي قالب‌گيري محکم استفاده مي‌شود. در صورتيکه فقط از پارافين استفاده شود قالب‌ها بسيار شکننده خواهند شد.

پس از اين مرحله کار روي نمونه‌ها وارد مسير جديدي مي‌شود که شامل قالب‌گيري، برش و رنگ‌آميزي و در نهايت مونتاژ لام و لامل است. براي قالب‌گيري بايد نمونه‌هاي آبگيري شده را به وسيله پنست داخل ظرف مخصوص قالب‌گيري قرار داده، روي آن محلول موم و پارافين ريخت و بعد از گذشت چند دقيقه شماره نمونه‌ها را روي آن‌ها قرار داد. اين عمل در اصطلاح کوله کردن نمونه‌ها  ناميده مي‌شود و نياز به دقت کافي دارد. براي کامل‌تر شدن اين مرحله قالب‌ها تا شروع زمان برش داخل يخچال قرار مي‌گيرد. ‏

5) برش با ميکروتوم

 براي شروع اين مرحله به چند دستگاه جداگانه نياز است که اين دستگاه‌ها و وسايل شامل: ميکروتوم، تيشوفلوت، چراغ مطالعه و قلم الماس است.‏
1) ميکروتوم: دستگاهي است که از آن براي تهيه برش هاي نازک از  بافتي که به صورت بلوک در آمده، استفاده مي‌کنند. اين دستگاه داراي توانايي برش بافت در ضخامت‌هاي گوناگون است و آن را به دو بخش بيروني و دروني تقسيم مي‌کنند. در بخش دروني دستگاه، چرخ دنده‌هاي مختلفي تعبيه شده است که به وسيله دسته ميکروتوم به چرخش در مي‌آيد و ميله تنظيم ميکرومتر، درجه تنظيمي را به داخل منتقل مي‌کند.

با چرخش دسته مي‌توان برش هايي به ضخامت 1 تا 30 ميکرون و حتي بالاتر تهيه کرد. قسمت بيروني دستگاه شامل دسته، گيره بلوک، پيچ تنظيم زاويه بلوک، جاي نگهدارنده چاقوي ميکروتوم، پيچ تنظيم کننده زاويه تيغ ميکروتوم، درجه ميکرومتر و پيچ يا دسته جلوبرنده چاقو به وسيله دست است. بر روي دسته، ميله‌اي تعبيه شده که به‌وسيله آن مي‌توان دسته را قفل نموده تا کاملا ثابت شود و بدين‌وسيله احتمال آسيب به دست يا خراب شدن بلوک کم مي‌شود.

6) رنگ‌آميزي بافت‌ها

اين مرحله  شامل دو نوع روتين و اختصاصي است:
رنگ‌آميزي روتين: روش رنگ‌آميزي که در آزمايشگاه‌هاي پاتولوژي به طور معمول و روتين استفاده مي‌شود، روش هماتوکسيلين- ائوزين است. با اين روش هسته سلول رنگ بنفش و سيتوپلاسم رنگ صورتي به خود مي‌گيرد.
دراين رنگ‌آميزي، ابتدا 3 حمام گزيلول موجود است که براي شفاف سازي و از بين بردن پارافين باقي مانده در اطراف بافت‌ها استفاده مي‌شود. نمونه‌ها در هر ظرف گزيلول  به مدت 5 دقيقه قرار داده مي‌شود. بعد از گزيلول 4 ظرف الکل درجه بندي شده قرار دارد.

نمونه‌ها را در هر کدام به مدت 2-1 دقيقه گذاشته و بعد با آب شستشو داده مي‌شود و بعد  بلافاصله  در ظرف حاوي هماتوکسيلين قرار مي‌گيرد. زمان قرار گرفتن در هماتوکسيلين 15-10 دقيقه است كه اين زمان بستگي به تازه يا کهنه بودن رنگ دارد. لازم است بعد از اين مرحله نمونه‌ها با آب شستشو داده شده و بافت هاي اضافي اطراف آنها پاک شود.

شستن لام

بعد از تميز کردن لام‌ها، آن‌ها را داخل اسيد الکل شناور کرده تا رنگ هاي اضافي داخل بافت از بين برود. بعد از اسيد الکل نوبت به کربنات کلسيم مي‌رسد. وظيفه اين محلول، رنگ‌آميزي زمينه بافت است و باعث مي‌شود هسته آبي به نظر برسد. ظرف بعدي ائوزين است که باعث قرمز شدن سيتوپلاسم مي‌گردد. بعد از چند ثانيه که نمونه ‌ها داخل ائوزين قرار گرفت آن‌ها را با آب شستشو داده، بعد به ترتيب داخل 4 ظرف الکل قرار مي‌گيرد.

اين الکل‌ها هم درجه بندي شده و به ترتيب 70-80-90 و 96درجه است و بافت‌ها در هر کدام،   حدود 5-3 ثانيه قرار مي‌گيرد. 2 ظرف آخر شامل گزيلول است که براي شفاف تر شدن بافت‌ها استفاده مي‌شود. زمان قرارگيري نمونه‌ها درگزيلول در حدود 5-3دقيقه است.‏

‏7) مونتاژ لام و لامل

براي اين کارابتدا لازم است پشت لام‌ها را خشک کرده و بعد لاملي را که قبلا” روي آن يک تا د و قطره چسب مخصوص ريخته شده، با پنس روي لام قرار داد. بعد اطراف لام را کاملا” تميز کرده و اجازه داد تا در دماي آزمايشگاه خشک شود. در آخر شماره نمونه‌ها روي برچسب نوشته شده و با دقت روي لام‌ها چسبانده مي‌شود. سپس  لام‌ها همراه‎ ‎با‎ ‎برگه در خواست آنها در اختيار پاتولوژيست براي تشخيص نهايي قرار گيرد.