رنگ آمیزی پاپانیکولائو یک تکنیک رنگ آمیزی سیتولوژیکی است که توسط جورج پاپانیکولائو در سال 1942 توسعه یافت. رنگ پاپانیکولائو یکی از پرکاربردترین رنگ آمیزی ها در سیتولوژی است، که برای کمک به آسیب‌شناسان در تشخیص سرطان دهانه رحم در تست پاپ اسمیر انجام می شود، اما برای رنگ آمیزی نمونه های غیر زنانه از انواع ترشحات بدن و بیوپسی های سوزنی کوچک از اندام ها و بافت ها نیز استفاده می شود. Papanicolaou سه فرمولاسیون از این رنگ آمیزی را در سال های 1942، 1954 و 1960 منتشر کرد.
رنگ آمیزی پاپ برای تمایز سلول ها در آماده سازی اسمیر ترشحات مختلف بدن استفاده می شود. نمونه ها می توانند پاپ اسمیر، خلط، ادرار، مایع مغزی نخاعی، مایع شکمی، مایع جنب، مایع سینوویال، مایع منی، مواد آسپیراسیون شده از طریق بیوپسی، نمونه های تومور، یا سایر مواد حاوی سلول باشند. رنگ آمیزی پاپ یک تکنیک بسیار قابل اعتماد است.
پارس پیوند، مشاور شما در تامین مواد مصرفی آزمایشگاه
برای خرید رنگ پاپانیکولا با مشاوران ما در تماس باشید.
راه های تماس با ما:
- شماره تلفن شرکت:021-40660490-5
- داخلی: 1053، 1055، 1056، 1058
- شماره های واتساپ: 09101701080, 09103146893, 09103147287, 09036641890
دایرکت اینستاگرام: @parspeyvand
شکل کلاسیک رنگ امیزی پاپ شامل پنج رنگ در سه محلول است:
رنگ آمیزی هسته ای، هماتوکسیلین، برای رنگ آمیزی هسته های سلولی استفاده می شود.
رنگ OG-6. نارنجی برای رنگ آمیزی کراتین استفاده می شود. نقش اصلی آن رنگ آمیزی سلول های کوچک کارسینوم سلول سنگفرشی کراتینه کننده موجود در خلط بود.
رنگ EA (Eosin Azure) متشکل از سه رنگ است. به عنوان مثال. EA-50، EA-65 که عدد نشان دهنده نسبت رنگ است،
ائوزین Y سلول های سنگفرشی سطحی اپیتلیال، هسته، مژک ها و گلبول های قرمز خون را رنگ می کند.
SF سبز روشن مایل به زرد، سیتوپلاسم تمام سلول های دیگر را رنگ می کند. این رنگ در حال حاضر بسیار گران است و به سختی به دست می آید، بنابراین برخی از تولید کنندگان به Fast Green FCF تغییر می دهند، با این حال نتایج بصری متفاوتی را ایجاد می کند و توسط برخی رضایت بخش تلقی نمی شود.
قهوه ای بیسمارک Y هیچ رنگی ندارد و در فرمولاسیون های امروزی اغلب حذف می شود.
هنگامی که رنگ آمیزی نمونه به درستی انجام شود، باید رنگ هایی را از کل طیف نمایش دهد: قرمز، نارنجی، زرد، سبز، آبی و بنفش. الگوهای کروماتین به خوبی قابل مشاهده هستند. رنگ‌آمیزی منجر به شفافیت سلول‌ها می‌شود، بنابراین نمونه‌های ضخیم‌تر با سلول‌های همپوشانی را نیز می‌توان تفسیر کرد.
در یک نمونه به خوبی آماده شده، هسته های سلولی به رنگ آبی تا سیاه هستند. سلول‌های دارای محتوای کراتین بالا زرد هستند، گلیکوژن نیز زرد رنگ می‌شود. سلول های سطحی نارنجی تا صورتی و سلول های میانی و پارابازال سبز فیروزه ای تا آبی هستند. سلول‌های متاپلاستیک اغلب به صورت هم‌زمان سبز و صورتی رنگ می‌شوند.
رنگ آمیزی پاپا نیکولا چگونه انجام می شود؟
روش رنگ آمیزی پاپ به دو نوع پیش رونده progressive و پس رونده regressive طبقه بندی می شود. در روش progressive ، هسته به شدت مورد نیاز رنگ آمیزی می شود و سپس عامل آبی رنگ می شود. مایر هماتوکسیلین و هماتوکسیلین گیل ترجیح داده می شوند. در روش regressive اسمیر با رنگ هسته ای با یک هماتوکسیلین غیر اسیدی رنگ آمیزی می شود. رنگ های اضافی با محلول اسید HCL رقیق پاک می شود. هریس هماتوکسیلین برای روش regressive ترجیح داده می شود. روش progressive رایج ترین روشی است که امروزه در آزمایشگاه ها مورد استفاده قرار می گیرد. کنترل آن آسان تر است و پایداری بیشتری را به صورت روزانه و همچنین برای اتوماسیون فراهم می کند.
روش های معمولی و سریع رنگ آمیزی پاپ دارای معایب بسیاری بود. تثبیت مرطوب وقت گیر بود، نشان دادن آرتیفکت های خشک کردن به ویژه در لبه های اسمیر که ممکن است برای تفسیر مشکل ایجاد کنند، خونریزی، از بین رفتن سلول، ظاهر کوچکتر/دیسکویی سلول ها، پیچیده/ زمان بر، نیاز به حجم قابل توجهی اتانول دارد. و عامل آبگیری که گران است، نیاز به مجوز و تجدید دارد. علاوه بر اینها الکل و زایلن محلول های قابل اشتعال هستند و باید به طور ایمن نگهداری شوند. دفع زایلن پرهزینه است، در واقع گران تر از خرید است.
از این رو برای اصلاح رنگ پاپ معیارهایی در نظر گرفته که هدف آنها ارزانتر و مقرون به صرفه کردن این روش برای بهبود کیفیت رنگ‌آمیزی و مورفولوژی واضح سلول‌ها، یافتن جایگزین الکل است.
مراحل رنگ‌آمیزی پاپانیکولا به طور خلاصه به شرح زیر می باشد:
- لام را جهت تثبیت به مدت ۱۵ دقیقه در اتانول ۹۵ درصد قرار دهید. سپس آن را آبکشی کنید.
- لام را به مدت ۱ الی ۳ دقیقه در محلول هماتوکسلین قرار دهید. سپس آن را آبکشی کنید.
- از آنجایی که محلول‌های هماتوکسلین متفاوتی وجود دارند، زمان رنگ آمیزی نیز بین ۱ الی ۳ دفقیقه متغیر است.
- لام را حدود ۱۰ مرتبه در اتانول ۹۵ درصد فروبرده و از جار خارج نمایید. (حرکت dip)
- سپس آن را به مدت ۱ دقیقه و نیم درون رنگ OG-6 قرار دهید.
- لام را حدود ۱۰ مرتبه در اتانول ۹۵ درصد فروبرده و از جار خارج نمایید. (حرکت dip)
- لام را با محلول EA-50 یا Modified EA-50 یا EA-65 به مدت ۲٫۵ دقیقه رنگ کنید.
- حدود ۲ مرتبه در اتانول ۱۰% درصد فروبرده و از جار خارج نمایید. (حرکت dip) . سپس آن را به مدت ۱ دقیقه درون اتانول ۱۰۰% قرار دهید.
- در نهایت لام را در ۲ تغییر زایلن، هرکدام ۲ دقیقه قرار دهید.
مراحل فوق به شرح زیر توضیح داده می شوند:
مرحله فیکساسیون:
ابتدا لام های مربوط به نمونه های سیتولوژی را در 3 ظرف گزیلول (هر کدام به مدت 20 دقیقه) قرار می دهیم سپس آنها رادر الکل 96 درجه حداقل به مدت 30 دقیقه قرار داده تا کاملا فیکس شوند. سپس نمونه ها را به ترتیب 10 بار به الکل 80 درجه و 10 بار به الکل 70 درجه وارد و خارج کرده و بعد با آب شستشو می دهیم.
مرحله رنگ آمیزی هسته:
در این مرحله ابتدا نمونه ها را به مدت 5 دقیقه در رنگ هماتوکسین که رنگ مخصوص هسته است قرار می دهیم سپس لام ها را با آب قلیایی یا آب شهری بدون کلر(چون کلر رنگ هماتوکسین را از بین می برد) شستشو می دهیم. در مرحله بعد لام ها را یک بار وارد محلول اسید الکل می کنیم تا رنگ هماتوکسین سیتوپلاسم از بین برود سپس آنها را دوباره شستشو می دهیم. بعد لام ها را 3 بار وارد محلول کربنات لیتیم می کنیم تا رنگ هسته فیکس شود سپس با آب لام ها را شستشو می دهیم.
مرحله رنگ آمیزی سیتوپلاسم:
برای رنگ آمیزی سیتوپلاسم ابتدا لام ها را به تعداد 10 بار وارد الکل 96 درجه می کنیم. بعد به مدت 4 دقیقه نمونه ها را در محلول رنگی Orange(Og6) قرار می دهیم. سپس نمونه ها را 2 بار در الکل 96 درجه وارد کرده و بعد به مدت 5 دقیقه در رنگ EA50 قرار می دهیم.
مرحله آبگیری:
در این مرحله نمونه ها را با کمک الکل آبگیری می کنیم بدین ترتیب که 2 ظرف حاوی الکل 96 درجه و دو ظرف حاوی الکل مطلق و 3 ظرف حاوی گزیلول تهیه کرده و لام ها را به ترتیب وارد ظروف حاوی الکل با درجه پایین ، الکل بادرجه بالا و گزیلول می کنیم .
پس از رنگ آمیزی لام ها بر روی آنها چسبی به نام Canad Bond می ریزیم. سپس بوسیله لام مقداری گزیلول برداشته و لامل را بر روی ان قرار می دهیم. در هنگام گذاشتن لامل باید دقت کنیم که حبابی ایجاد نشود.