توضیحات
خط کش SRID
جهت اندازه گیری قطر هاله رسوبی در روش انتشار ايمني شعاعي منفرد (immunodiffusion radial single: SRID) بکار میرود.
انتشار ايمني شعاعي منفرد (immunodiffusion radial single: SRID)
اساس اين روش مبتني بر انتشار يكي از دو عامل آنتي ژن يا آنتی بادي است.
به عبارت ديگر يكي از دو مولكول آنتي ژن يا آنتي بادي را در ژل مخلوط كرده و ثابت ميگيرند. سپس طرف ديگر واكنش (آنتي بادي يا آنتي ژن) را در حفراتي كه در آگار ايجاد ميكنيم ميريزيم. مولكول هاي موجود در حفره با انتشار و نفوذ شعاعي در ژل نهايتاً به ناحيه تعادل رسيده و با مولكول ديگر واكنش داده و رسوب ميدهد.
بنابراين فقط يكي از مولكول ها به طور شعاعي در ژل نفوذ ميكند. در اين روش اغلب آنتي بادي عليه آنتي ژن مورد سنجش را در زماني كه ژل هنوز به صورت مايع است (55 درجه سانتيگراد) به آن اضافه ميكنيم، سپس ژل را بر روي يك صفحه صاف پخش ميكنيم و بعد از اينكه ژل به صورت جامد درآمد حفراتي داخل آن تعبيه ميكنيم.
حجم ثابتي از آنتي ژن يا نمونه ي حاوي آنتي ژن را به داخل حفرات ميريزيم. آنتي ژن در ژل انتشار يافته و با آنتي بادي برخورد ميكند و واكنش آنتي ژن – آنتي بادي شكل ميگيرد كه به صورت حلقه رسوبي در اطراف حفره ظاهر ميگردد.
قطر اين حلقه به تدريج افزايش مييابد و هنگامي كه تعادل بين غلظت آنتيژن آنتيبادي برقرار شد يك حلقه رسوبي ثابت و پايدار تشكيل ميشود. از اين روش به طور گستردهاي براي اندازه گيري كمي بسياري از پروتئين ها استفاده ميشود.
در اين روش با استفاده از محلول هاي استاندارد و رسم منحني مربوطه ميتوان مقدار آنتي ژن را تعيين كرد. قطر حلقه هاي رسوبي مربوط به محلول هاي استاندارد بعد از تشكيل خط رسوبي در ناحيه ي تعادل غلظت آنتي ژن آنتي بادي اندازه گيري ميشود. اين تعادل غلظت،بسته به مشخصات مولكولي آنتيژن مورد نظر، بعد از 24 تا 48 ساعت يا بيشتر حاصل ميگردد.
در اين حالت مجذور قطر حلقه هاي رسوبي با مقدار آنتيژن مورد نظر نسبت مستقيم دارد. بنابراين ميتوان با قرار دادن مجذور قطر حلقه هاي رسوبي مربوط به محلول ها يا استاندارد، بر روي محور عمودي و غلظت آنها بر روي محور افقي منحني استاندارد را ترسيم نمود.
حساسيت اين روش در حدود 10 ميليگرم در دسي ليتر ميباشد. با وجود زمان طولاني كه براي واكنش مورد نياز ميباشد، اين روش كاربرد زيادي دارد كه علت اصلي آن را ميتوان به عدم نياز به وسايل اختصاصي براي انجام واكنش دانست.
اين روش بر مكانيسم ساده اي استوار است و با توجه به نياز محقق مي تواند براي جستجو و عيار سنجي آنتي ژن يا آنتي بادي به كار برده شود.
مواد و ابزار مورد نياز:
1. پليت SRID (حاوي ژل +anti-IgG)
2 .نمونه هاي استاندارد (كاليبراتور) شماره1و2 و3 .
3 .نمونه كنترل، شماره 4 .
4. نمونه های سرمي با شماره هاي.8 ،7 ،6 ،5
5 .خط كش ويژه و استاندارد «SRID » براي اندازهگيري قطر دايره ي رسوبی.
6 .سرنگ انسولين يا سرنگ هاميلتون يا سمپلر براي پركردن چاهك ها (چاهك ها نبايد لبريز شوند).
روش كاربرد خطكش SRID
خط كش SRID دو محور اندازه گيري دارد، يكي خط كش ميلي 23 سانتي در لبه است و ديگري مثلث اندازه گيري قطر دايره رسوبي در داخل صفحه تا mm 10 است. در داخل صفحه خط كش SRID دو خط كج و يك خط موازي با افق در وسط به شكل ميانه وجود دارد، خطوط كوتاه عمودي، با فاصله معين، دو خط كج يا ساق هاي مثلث ناقص را مدرج كردهاند. ارقام روي خطوط كوتاه عمودي، نمايانگر مجذور اين فاصله و در واقع مجذور قطر دايرههاي رسوبي (d^2) ميباشند. براي اندازهگيري قطر دايرههاي رسوبي به وسيله خطكش SRID ،پليت SRID را از پشت روي خط كش گذاشته و آنقدر آن را جابجا كرده تا محيط خارجي دايره رسوبي با دو خط كج كاملاً مماس شود و خط ميانه درست از وسط چاهك
بگذرد. در اين حالت رقم پايين خط كوتاه عمودي كه از وسط چاهك ميگذرد، نشان دهنده قطر دايره رسوبي (d) است كه ميتوان مجذور همان قطر را (d2) در بالاي خط كوتاه عمودي يافت. براي اندازهگيري واكنشهاي رسوبي بيضي شكل بايد اندازهگيري را در دو جهت عمود برهم انجام داد و ميانگين دو قطر كوچك و بزرگ را بر روي منحني برد.
نقد و بررسیها
هنوز بررسیای ثبت نشده است.