نقد و بررسی
ADA تستی می باشد که در آن آنزیمی به نام آدنوزین دآمیناز را مورد بررسی قرار می گیرد .این آنزیم که در مسیرهای متابولیکی فعالیت دارد، با دآمینه کردن آمینواسید آدنوزین، آن را به اینوزین و داکسی اینوزین تبدیل می کند.
در بیمارانی که دچار نقص ایمنی شدید SCID (نوعی سندروم اتوزومال مغلوب) هستند، از این آنزیم وجود ندارد که به آن نقص ADA یا ADA-SCID نام برده می شود که به آن نقص ایمنی مرکب نیز گفته می شوند.
در نتیجه آدنوزین تجزیه نمی شود و به عناصر دیگر تبدیل می شود و در بافته ای بدن جمع می شود و متعاقبا باعث بروز برخی مشکلات می شود. از جمله این مشکلات عدم مقاومت در برابر بیماریهای باکتریایی و قارچی و ویروسی می باشد که این افراد را به شدت مستعد عفونت می کند که دائم نیز تکرار می شوند.
علائم بیماری نقص ADA
- اسهال مزمن
- پنومونی (ذات الریه)
- راش های پوستی
- سوء تغذیه
- کاهش رشد کودکان نسبت به کودکان سالم
اهمیت کلینیکی
ADA آنزیمی است که واکنش دیـآمیناسیون آدنوزین به اینوزین را یک طرفه کاتالیز می کند. این آنزیم بطور گسترده در بافتهای بدن و عمدتاً در لنفوسیت T پخش شده است. افزایش فعالیت این آنزیم در بیماری هایی مانند: هپاتیت حاد ، مزمن و فعال، هپاتیت ویرال، سیروز کبدی و هپاتوم (تومورکبد) و نیز بیماریهایی مانند سل، تیفوئید، آرتریت روماتوئید، بروسلوز، سارکوئیدوز و لوسمی ALL مشاهده می گردد. اندازه گیری ADA همراه با تست های دیگر کبد مانند: ALT و GGT ارزش ویژه ای در تشخیص بیماری های کبد دارد. از موارد مهم اندازه گیری ADA بررسی فعالیت آن در مایع CSF و مایع پلور است که با حساسیت بسیار زیاد، اجازه تشخیص بیماری سل را می دهد. کاهش ADA در حدود یک چهارم کودکان مبتال به بیماری SCI( immunodeficiency combined Severe ) دیده شده است.
شرایط نمونه گیری
- نمونه می بایست سریعاً سانتریفیوژ شده و 0.3 ml از مایع رویی را برداشته و به ویال پلاستیکی انتقال دهید.
- جهت جمع آوری نمونه، بر روی یخ نگهداری شود.
- نمونه فوراً تا زمان آزمایش فریز گردد.
ملاحظات نمونه گیری
- نمونه گیری مایعات بیولوژیک باید توسط پزشک انجام شود.
- نمونه باید تا زمان آزمایش فریز شود.
- نمونه دفریز شده نباید مجدداً فریز گردد.
- سن بیمار را یادداشت نمایید.
- نوع نمونه را یادداشت نمایید.
موارد عدم پذیرش نمونه
- نمونه همولیز شده مورد قبول نمی باشد.
- فریز دفریز مکرر باعث رد نمونه می گردد.
شرایط نگهداری
- نمونه به مدت 12-6 ساعت در دمای اتاق (RT) و 1 هفته در دمای C◦4 پایدار است.
- جابجایی نمونه روی یخ صورت گیرد.
کاربردهای بالینی
فعالیت آنزیمی در بیماران توبرکلوز نسبت به سایر بیماری های تنفسی کودکان بسیار بالاتر است. افزایش آنزیم در جریان عود مجددی سارکوئیدوز مزمن مشاهده می شود. در بیماری های مجاری صفراوی پایین و بیماری های مزمن کبدی همیشه بالاست.
اساس روش
این کیت بر اساس یک روش آنزیمی تهیه شده است که در آن سوبسترای آدنوزین به اینوزین تبدیل شده و آمونیاک آزاد می گردد. در مرحله دوم آمونیاک در مجاورت آلفا کتوگلوتارات و NADPH توسط آنزیم گلوتامات دهیدروژناز به گلوتامات و NADP تبدیل میگردد. کاهش جذب متناسب با مقدار ADA نمونه میباشد و در طول موج 340 نانومتر اندازه گیری می شود.
معرف ها
| Storage | Content | Presentation |
| 2-8°C | 1×50 ml | R1: ADA Enzyme reagent |
| 2-8°C | Powder(for 10ml) | R2: ADA Substrate reagent |
شرایط نگهداری
معرف ها در دمای 8-2 درجه سانتیگراد تا تاریخ انقضاء مندرج برروی ویال ها پایدار می باشند، مشروط بر اینکه درب ویال ها بسته و آلوده نگردند. پس از هر بار استفاده درب ویالها را بسته و به یخچال انتقال دهید.
پس از باز نمودن بمدت 30 روز پایدار می باشند. آماده سازی معرف ها: معرف R1 آماده مصرف می باشد. جهت آماده سازی R2 میزان 2 میلی لیتر آب مقطر به ریال آن افزوده خوب مخلوط کنید تا یکنواخت شود. پایداری این معرف 4 هفته در یخچال و 2 روز در دمای اتاق است. توصیه می شود پس از مصرف بلافاصله درب ویال را بسته و به یخچال انتقال یابد.
نمونه مورد آزمایش
سرم تازه بدون همولیز، پالسما با سدیم هپارین و یا EDTA و CSF و Pleura .عبدا از آمونیوم هپارین و نمکهای فلوراید استفاده نشود. پایداری ADA در دمای 8-2 درجه سانتیگراد به مدت یک هفته می باشد. کلیه نمونه های مورد آزمایش مانند: سرم، پالسما، CSF و Pleura باید حتما عاری از همولیز باشند.
CSF :نمونه را بلافاصله سانتریفیوژ و جدا کنید. نمونه در دمای اتاق به مدت 2 ساعت و در دمای 8-2 درجه سانتیگراد به مدت یک هفته و در دمای فریزر به مدت 1 ماه دوام دارد.
Pleural :نمونه را بلافاصله سانتریفیوژ و جدا کنید. نمونه در دمای اتاق به مدت 2 ساعت و در دمای 8-2 درجه سانتیگراد به مدت یک هفته و در دمای فریزر به مدت 1 ماه دوام دارد. نمونه باید حتما شفاف باشد.
پارامترها
- دما: 37 درجه سانتیگراد
- طول موج: 340 نانومتر
- کووت:1سانت
- حجم نمونه: 200 میکرولیتر
- حجم معرف: 1200 میکرولیتر
- خوانش: مقابل آب مقطر یا هوا
- نوع واکنش: کاهشی.
| روش اندازه گیری دستی | بلانک معرف | کالیبراتور | نمونه |
| نمونه /کالیبراتور | — | 200 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| آب مقطر | 200 میکرولیتر | — | — |
| معرف R1 | 1000 میکرولیتر | 1000 میکرولیتر | 1000 میکرولیتر |
| به آرامی مخلوط نموده، 3 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کرده جذب نوری بالنک، کالیبراتور و نمونه ها را مقابل آب مقطر خوانده و یادداشت نمائید. (A1) | |||
| معرف R2 | 200 میکرولیتر | 200 میکرولیتر | 200 میکرولیتر |
| مخلوط کرده، 5 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده و راس 5 دقیقه جذب ها را مجدداً خوانده و یادداشت نمائید. (A2) | |||
واکنش تداخلی
وجود کلرور جیوه– بنزوآت باعث پایین آمدن فعالیت آنزیمی در شرایط واکنش شیمیایی (Invitro) می گردد.
توضیحات
کمبود آنزیم آدنوزین دآمیناز در 25% موارد بیماری نقص شدید ایمنی مرکب (SCID) مشاهده می گردد.
مقادیر طبیعی ADA
- اگزودا مایع پلرو : >3 .0 , g/dL: 1.6-9.2 U/L پروتئین تام
- ترانسودا مایع پلرو: g/dL :0-6.7 U/L , 3.0 پروتئین تام
- اگزودا مایع پریتوان : >2.0 , g/dL : 0-7.6 U/L پروتئین تام
- ترانسودا مایع پریتوان : <2.0 , g/dL : 0-7.6 U/L پروتئین تام
- خون: U/gr Hb 0.5 -1.7
- سرم: U/L 11.5 – 25
روش انجام آزمایش ADA
- روش متداول:کالریمتریک
- سایر روش ها: اسپکتروفتومتری UV و فلوئورومتری
پیشنهاد بررسی: بروسلا آگار کوندا – نوار قند MN کوندا – PH متر رومیزی لابترون – لوله مخروطی در پیچدار لابترون –کنترل ها شرکت من –جعبه نوک سمپلر زرد دربدار لابترون
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.