نقد و بررسی

محیط کشت DNAse Agar چیست؟

محیط کشت میکروبی DNAse Agar، یک محیط کشت جامد و افتراقی است. DNase (دزوکسی ریبونوکلئاز) یک آزمایش بیوشیمیایی است که برای تمایز موجودات زنده بر اساس توانایی آنها در تولید آنزیم DNase بکار می رود.

به منظور تشخیص باکتری های مولد آنزیم DNAse مانند استافیلوکوک های بیماری زا و سراشیا بکار می رود. DNase آنزیمیست که توسط تمام نژاد های استافیلوکوک اورئوس ساخته می شود.

اما فقط 25 درصد از نژاد های استافیلوکوک کواگولاز منفی می توانند این آنزیم را تولید کنند. آنزیم DNase در برابر حرارت مقاوم است و آنزیمی خارج سلولی محسوب می شود. این آنزیم DNA را به واحد های کوچکتری به نام نوکلئوتید تجزیه می کند و نوع باکتری شناسایی می شود.

اولین بار جفری، هالتمن و جوز DNA را در یک محیط کشت عمومی با آگار ترکیب کردند. در سال 1958 دی سالو ارتباطی بین کواگولاز و فعالیت DNAse دید. در سال 1969 اسمیت و همکارانش فرمولاسیون را با اضافه کردن تولوئیدن و کریستال ویوله تغییر دادند.

ویژگی ها :

1. توانایی حمله به پیوندهای DNA و شکستن آنها
   
2. نوعی آنزیم خارج سلولی
3. مقاوم به گرما و حرارت

کاربردهای محیط کشت تست Dnase آگار :

1. برای تعیین و شناسایی توانایی یک ارگانیسم در تولید آنزیم DNase
2. شناسایی باکتری استافیلوکوک اوروئوس از سایر استافیلوکوک ها
   
3. تفکیک و تشخیص گونه سراشیای بدون پیگمان (امکان دارد که به اشتباه بعنوان گونه انتروباکتر و کلبسیلا تشخیص داده شود)
4. بررسی عملکرد آنزیم دزوکسی ریبونوکلئاز باکتری و قارچ ها

ترکیبات محیط کشت DNAse Agar :

• تریپتون
• پپتون سویا
• دئوکسی ریبونوکلئیک اسید
• سدیم کلرید
• باکتریولوجیکال آگار

طرز تهیه محیط کشت DNAse Agar :

1. 42 گرم از پودر را به یک لیتر آب مقطر یا دیونیزه خالص اضافه می کنیم.
2. بر روی حرارت هم می زنیم تا به جوش بیاید و محیط کاملا حل شود.
3. با اتوکلاو کردن محیط حل شده در فشار 121 درجه سانتیگرادبه مدت 15 دقیقه استریل می کنیم.
4. سپس تا دمای حدود 40-45 درجه سانتیگراد سرد می کنیم.
5. محیط را در صفحات استریل پتری دیش می ریزیم.
6. در صورت افزودن نشانگرها، قبل از استریل، 0.1 گرم تولویدین O یا متیل سبز به محیط اضافه می کنیم.

اساس آزمایش:

اگر ارگانیسم دارای آنزیم دزوکسی ریبونوکلئاز باشد؛ اسیدنوکلئیک را هیدرولیز می کند. که با استفاده از معرف HCL و ایجاد هاله شفاف در اطراف محل رشد باکتری می توان شناسایی کرد. محیط مناسب برای برداشتن کلنی پلیت های LEMB Agar یا Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood حاوی ارگانیسم مورد نظر می باشد.

ویژگی های آزمایش:

• حساسیت: ۹۹% استافیلوکوک های کواگولاز مثبت،  DNase مثبت نیز هستند.
• اختصاصیت:۲۰% استافیلوکوک های کواگولاز منفی، DNase مثبت هستند.

DNase Test Agar که اسید کلریدریک یک نرمال روی آن ریخته شده است :

• مثبت: فوراً هاله های شفاف کاملاً مشخصی اطراف کلنی یا محل تلقیح را در محیط کشت احاطه می کنند.
• منفی: اطراف کلنی ها یا محل تلقیح شفاف نمی شود.

DNase Test Agar که تولوئیدین بلو ۱/۰% روی آن ریخته شده است :

• مثبت: هاله های شفاف قرمز صورتی، اطراف کلنی یا محل تلقیح را احاطه می کنند. محیط در جایی که DNA باقی مانده باشد آبی می شود.
• منفی: هاله های کدر قرمز صورتی اطراف کلنی یا محل تلقیح را احاطه می کنند.

پس از انکوباسیون روی پلیت هایDNase Test Agar With Toluidine Blue ، معرف ریخته نمی شود و مستقیماً بررسی می گردد.

تداخلات:

ممکن است بعضی از سویه های استافیلوکوک روی DNase Test Medium with Toluidine Blue مهار شوند. / پروتئوس ولگاریس، سودوموناس آئروژینوزا و آئروموناس، واکنش های مثبت زیادی برای تولید DNase نشان می دهند.

پیشنهاد بررسی:  لوله وکیوم CBC K2, K3 لبویر  – لوله لخته کلات بدون ژل(Clot Activator) لبویر  – لوله وکیوم لخته ژل دار لبویر 

برای دریافت اطلاعات بیشتر درباره ی محیط DNAse آگار میرمدیا با کارشناسان پارس پیوند تماس بگیرید.