نقد و بررسی

محیط کشت میکروبی مانیتول سالت آگار ( Mannitol Salt Agar (MSA)) چیست؟

مانیتول سالت آگار به عنوان محیط کشت انتخابی برای جداسازی استافیلوکوک های بیماری زا از نمونه های کلینیکی و غیر کلینیکی به کار می رود. محیط کشت مانیتول سالت آگار حاوی غلظت بالایی از نمک است.

در نتیجه مناسب برای تشخیص باکتری هاییست که در محیط هایی با غلظت زیاد نمک، زندگی می کنند. باکتری استافیلوکوکوس اورئوس می تواند در غلظت های بالای نمک زنده بماند و این محیط کشت بسیار مناسب برای تشخیص این نوع باکتری است.

مانیتول سالت آگار یک محیط کشت مهم در آزمایشگاه های تشخیص طبی محسوب می شود زیرا باعث مشخص شدن میکروب های پاتوژنیک در یک دوره کوتاه از زمان می شود. این محیط رشد گروهی از باکتری های خاص را تشویق می کند در حالی که از رشد دیگران جلوگیری می کند.

استافیلوکوک ها به طور گسترده در طبیعت پراکنده اند. اما بیشتر بر روی پوست و غده های پوستی و غشای موکوسی پستانداران و پرندگان یافت می شوند. گونه های کوآگولاز مثبت مثل استافیلوکوکوس اورئوس به خوبی به عنوان بیماریزاهای فرصت طلب انسانی شناخته می شوند.

استافیلوک توانایی منحصر به فردی در رشد روی محیط های با مقدار نمک بالا دارد. پس جداسازی استافیلوکوک های کوآگولاز مثبت روی محیط کشت مانیتول آگار فنول رد با ۷٫۵% NaCl صورت می گیرد.

ویژگی ها

• درصد بالاتر نمک در مقایسه با سایر محیط های کشت
• محیط کشت انتخابی-افتراقی
• باکتری هایی می توانند دراین محیطی رشد کنند که اولا مانیتول را تخمیر نمایند و ثانیا در مقابل غلظت زیاد نمک طعام مقاوم باشند.

کاربردهای محیط کشت مانیتول سالت آگار

مانیتول سالت آگار

• برای جداسازی انتخابی و تمایز استافیلوکوکوس اورئوس از نمونه های بالینی
• برای شمارش استافیلوکوک در مواد غذایی و لبنیات استفاده می شود.
• در راهنمای تجزیه و تحلیل باکتری برای آزمایش مواد آرایشی
• در معاینه باکتریایی آب استخر شنا ، آبگرم و آب آشامیدنی با استفاده از فیلتراسیون غشایی

ترکیبات محیط کشت Mannitol Salt Agar :

• عصاره گوشت گاو
• پپتون پروتئاز
• HM پپتون
• سدیم کلرید
• D-مانیتول
• فنول رد
• آگار

PH نهایی در دمای ۲۵ درجه سانتی گراد،حدود ۷٫۴ می باشد.

• عصاره گوشت گاو و پروتئاز پپتون فاکتورهای اصلی برای رشد را فراهم می کند. (مواد مغذی مانند نیتروژن، ویتامین ها، مواد معدنی و اسیدهای آمینه ضروری برای رشد).
• این محیط حاوی 7.5٪ غلظت کلرید سدیم است که منجر به مهار نسبی یا کامل ارگانیسم های موجود در بدن به غیر از استافیلوکوک می شود. کلرید سدیم همچنین الکترولیت های ضروری را برای انتقال و تعادل اسمزی تأمین می کند.
• مانیتول منبع کربوهیدرات قابل تخمیر است که تخمیر آن منجر به تولید اسید می شود. استافیلوکوکوس اورئوس روی این محیط رشد کرده و مانیتول را تخمیر کرده و کلنی های زرد تولید می کند. بیشتر گونه های منفی کوآگولاز استافیلوکوک ها و میکروکوک ها مانیتول را تخمیر نمی کنند و به صورت کلنی های کوچک قرمز رشد می کنند.
•  فنول رد به عنوان معرف pH به محیط کشت افزوده شده است. در محیط مانیتول سالت آگار وجود قند مانیتول و معرف قرمز فنل باعث می شود که اگر باکتری استافیلوکوک طلایی باشد کلنی هایی به رنگ زرد با هاله زردرنگ به وجود آید در صورتی که سایر استافیلوکوک ها معمولا کلنی های کوچکتر و قرمز با منطقه بنفش رنگ ایجاد می کنند.
• افزودن 5٪ v / v امولسیون زرده تخم مرغ تشخیص فعالیت لیپاز استافیلوکوک ها را به همراه تخمیر مانیتول امکان پذیر می کند. نمک باعث پاک شدن امولسیون زرده تخم مرغ می شود و تولید لیپاز به عنوان یک منطقه مات زرد در اطراف کلنی ها تشخیص داده می شود.
• آگار ماده جامد کننده است.

ساخت محیط کشت MSA مانیتول سالت آگار:

• 111 گرم  از پودر محیط کشت را در یک لیتر آب مقطر حل می کنیم.
• می جوشانیم تا محیط کاملا حل شود.
• اتوکلاو در دمای 121 درجه سانتیگراد به مدت 15-20 دقیقه انجام دهید.
• در صورت تمایل می توان امولسیون زرده تخم مرغ استریل (E7899) را پس از اتوکلاو به غلظت نهایی 5٪ در v / v اضافه کرد.
• در نهایت محیط کشت خنک شده (تا دمای 45-50 درجه سانتیگراد) را در ظروف پتری دیش استریل ریخته و اجازه می دهیم تا در دمای اتاق خنک شود.

محدودیت های آزمایش

چندین گونه استافیلوکوک غیر از aureus مانیتول مثبت هستند و کلنی های زرد احاطه شده توسط مناطق زرد را در این محیط تولید می کنند. (به عنوان مثال S. capitis ، S. xylosus ، S. cohnii ، S. sciuri ، S. simulans و سایر گونه ها). بنابراین ، آزمایش های بیوشیمیایی بیشتری برای شناسایی S. aureus یا سایر گونه ها لازم است.

بیشتر ارگانیسم ها به غیر از استافیلوکوک ها به دلیل برخی از موجودات دریایی هالوفیلیک، توسط غلظت بالای نمک موجود در این محیط مهار می شوند. چند سویه استافیلوکوکوس اورئوس ممکن است تخمیر با تأخیر مانیتول را نشان دهند. قبل از دور انداختن، پلیت های منفی باید یک شب دوباره انکوباسیون شوند و استافیلوکوکوس اورئوس فرضی باید با آزمایش کوآگولاز (با پلاسمای خرگوش) تأیید شود.

برای دریافت اطلاعات بیشتر درباره ی محیط کشت مانیتول سالت آگار میرمدیا با کارشناسان پارس پیوند تماس بگیرید.

بررسی پیشنهاد : محیط کشت سالمونلا شیگلا آگار – محیط سلنیت F – محیط پتیتو دکستروز براث – محیط نوترینت براث – محیط کشت آیرون آگار کوندا – محیط کشت دکستروز آگار کوندا – محیط کشت نوترینت آگار کوند – معرف نین هیدرین – معرف کلرورفریک – محیط کشت لاکتوز براث LB